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  2. 活性氧檢測試劑盒(紅色熒光)

    更新:2022-10-25 17:33:39

    中文名:活性氧檢測試劑盒(紅色熒光)說明書下載暫無
    英文名:Reactive Oxygen Species Assay Kit
    描述:活性氧檢測試劑盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)利用熒光探針 DHE 進行活性氧檢測。DHE 可自由透過活細胞膜進入細胞內,在細胞質中呈藍色熒光,被細胞內的 ROS 氧化后形成氧化乙啶摻入染色體 DNA 中,使細胞核呈現明亮的紅色熒光。在激發波長 535nm,發射波長 610nm 附近,使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、 熒光分光光度計、熒光酶標儀、流式細胞儀等檢測熒光強度,測定細胞內活性氧水平。具有背景低、靈敏度高、線性范圍寬、使用方便等優點,是一種快速簡便的組織或培養活細胞中 ROS 經典檢測方法。
    訂購信息
      貨號規格價格品牌
      G2706-10.2ml520GBCBIO
      G2706-20.5ml960GBCBIO
      G2706-31ml1580GBCBIO
    產品介紹
      產品簡介:
       活性氧檢測試劑盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit)利用熒光探針 DHE 進行活性氧檢測。DHE 可自由透過活細胞膜進入細胞內,在細胞質中呈藍色熒光,被細胞內的 ROS 氧化后形成氧化乙啶摻入染色體 DNA 中,使細胞核呈現明亮的紅色熒光。在激發波長 535nm,發射波長 610nm 附近,使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、 熒光分光光度計、熒光酶標儀、流式細胞儀等檢測熒光強度,測定細胞內活性氧水平。具有背景低、靈敏度高、線性范圍寬、使用方便等優點,是一種快速簡便的組織或培養活細胞中 ROS 經典檢測方法。
      產品特點:
      適用范圍:貼壁細胞、懸浮細胞、新鮮動物組織
      工作波長:最佳激發波長 480-535nm,最佳發射波長 590-610nm
      所需設備:流式細胞儀、熒光酶標儀、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計等
      儲存和穩定性:
      -20℃避光凍存。本試劑盒自訂購之日起一年內有效。
      試劑盒組成:
      貨號 G2706-1 G2706-2 G2706-3
      DHE Solution(5mM) 0.2ml 0.5ml 1ml
      說明書 1份 1份 1份
      注意事項:
      開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體收集于管底,避免開蓋時染液損失。
      要設有無DHE孵育的對照,即不加探針,只用0.01M PBS重懸的細胞。
      熒光探針標記后,一定要洗凈殘余的未進入細胞內的探針,以避免背景升高。多次清洗時注意操作規范,避免將細胞洗掉。
      對于藥物處理(孵育)時間較短的細胞(2小時以內、也有建議 4小時以內),可以先用熒光染料進行標記,后用藥物刺激細胞后。對于藥物處理時間較長的細胞(超過 4 小時或 6 小時以上),建議先用藥物處理(刺激)細胞,后用探針標記。
      DHE 在光照和空氣中易被氧化,保存和操作中應注意避光。
      對不同的細胞和組織,應選擇合適的孵育時間和濃度,以觀察ROS的變化。
      為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作

      使用說明:

      一、細胞樣本:

      A:收集細胞,進行活性氧測定

      1        細胞收集:

      懸浮細胞:2000rpm,離心5min,收集沉淀,用 0.01M PBS 或無血清培養液洗滌2次,1000rpm,離心5min,棄上清,取細胞沉淀;

      貼壁細胞:吸去培養液,用0.01M PBS 或無血清培養液反復吹打,使細胞層全部進入PBS 或培養液中,收集細胞懸液,用0.01M PBS 或無血清培養液洗滌2次,1000rpm,離心5min,棄上清,取細胞沉淀;

      2        加入DHE探針:用稀釋好的 DHE熒光探針重懸細胞沉淀,一般情況下,細胞密度要求1*106-2*107/ml,推薦探針初始工作濃度為10 μM(DHE 工作濃度可在 1μM~100 μM 范圍內,需進行預實驗確定最適濃度)。

      3        37 ℃孵育細胞10-90分鐘。通常情況下,10-30分鐘即可。

      注意:孵育時間長短與細胞類型、刺激條件、DHE 濃度等有關?梢悦扛5min顛倒混勻一下,使探針與樣本充分接觸。

      4        1000g,離心5min,去上清收集細胞沉淀,用 PBS 緩沖液洗滌 2 次,重懸細胞。

      5        進行熒光檢測,以熒光度數值表示結果。

      B:不收集細胞,直接將探針加入培養基測定

      1.       加入DHE探針:去除細胞培養基上清,加入用無血清培養液稀釋好的 DHE 探針(推薦探針終濃度為 10 μM),加入探針的體積以能蓋住細胞為宜,通常 6 孔板單孔不少于 500 μl。

      2.       37℃孵育細胞10-90分鐘。通常情況下,10-30 分鐘即可。

      注意:孵育時間長短與細胞類型、刺激條件、DHE 濃度等有關?梢悦扛 5min 顛倒混勻一下,使探針與樣本充分接觸。

      3.       棄去上層培養液,用無血清培養液或0.01M PBS反復吹打,使細胞層全部進入PBS或培養液中。

      4.       收集細胞懸液,用 0.01M PBS 或無血清培養液洗滌 2 次,去除未進入細胞內的探針,1000rpm,離心5min,棄上清,收集細胞沉淀,用PBS緩沖液洗滌2次,重懸細胞。

      5.       進行熒光檢測,以熒光度數值表示結果。

      二、動物組織樣本

      1.       細胞懸液制備:可采用單細胞懸液制備儀或傳統的組織處理方法如:酶解法、研磨法等制備單細胞懸液;

      2.       加入DHE探針:去除細胞培養基上清,加入用無血清培養液稀釋好的 DHE探針(推薦探針終濃度為 10 μM)。

      3.       37℃孵育細胞10-90分鐘。通常情況下,10-30分鐘即可。

      注意:孵育時間長短與細胞類型、刺激條件、DHE 濃度等有關?梢悦扛 5min 顛倒混勻一下,使探針與樣本充分接觸。1000g,離心5min,去上清收集細胞沉淀,用PBS緩沖液洗滌2次,重懸細胞。

      4.       進行熒光檢測,以熒光度數值表示結果。

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