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  2. 活性氧檢測試劑盒(綠色熒光)

    更新:2022-10-25 17:32:58

    中文名:活性氧檢測試劑盒(綠色熒光)說明書下載暫無
    英文名:Reactive Oxygen Species Assay Kit
    描述:活性氧檢測試劑盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit,也稱ROS Assay Kit)試劑盒采用 DCFH-DA (2,7-dichlorofluorescin diacetate)探針方法,是迄今最常用、最靈敏的細胞內活性氧檢測探針;钚匝醢ǔ踝杂苫∣2•−)、過氧化氫(H2O2)、羥基自由基(•OH)、過氧亞硝基(ONOO−)、一氧化氮(•NO)等,它們參與了細胞增殖生長、發育分化、衰老和凋亡等許多生理和病理過程。 DCFH-DA 沒有熒光,進入細胞后可以被酯酶水解為不能透過細胞膜的 DCFH(dichlorofluorescin),當活性氧存在時,DCFH 被氧化為強綠色熒光物質 DCF(dichlorofluorescein),熒光在激發波長 502 nm,發射波長 530 nm 附近有最大波峰,熒光水平與細胞內活性氧水平成正比。本試劑盒提供的活性氧檢測系統本底水平低,靈敏度高,重復性好,操作簡便。
    訂購信息
      貨號規格價格品牌
      G2716-1>100次380GBCBIO
      G2716-2>500次1280GBCBIO
      G2716-3>1000次1950GBCBIO
    產品介紹

      產品簡介:

       活性氧檢測試劑盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit,也稱ROS Assay Kit)試劑盒采用 DCFH-DA (2,7-dichlorofluorescin diacetate)探針方法,是迄今最常用、最靈敏的細胞內活性氧檢測探針;钚匝醢ǔ踝杂苫∣2•)、過氧化氫(H2O2)、羥基自由基(•OH)、過氧亞硝基(ONOO−)、一氧化氮(•NO)等,它們參與了細胞增殖生長、發育分化、衰老和凋亡等許多生理和病理過程。 DCFH-DA 沒有熒光,進入細胞后可以被酯酶水解為不能透過細胞膜的 DCFH(dichlorofluorescin),當活性氧存在時,DCFH 被氧化為強綠色熒光物質 DCF(dichlorofluorescein),熒光在激發波長 502 nm,發射波長 530 nm 附近有最大波峰,熒光水平與細胞內活性氧水平成正比。本試劑盒提供的活性氧檢測系統本底水平低,靈敏度高,重復性好,操作簡便。

      產品特點:

      l    適用范圍:貼壁細胞、懸浮細胞、新鮮動物組織

      l  工作波長:最佳激發波長 500(500±15 nm),最佳發射波長 525 (530±20nm),也可按照 FITC 熒光檢測條件檢測

      l    所需設備:流式細胞儀、熒光酶標儀、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計等

      儲存和穩定性:

      -20℃避光凍存。本試劑盒自訂購之日起一年內有效。

      試劑盒組成:

      貨號

      G2716-1

      G2716-2

      G2716-3

      DCFH-DA(10mM)

      0.1ml

      0.5ml

      1ml

      活性氧陽性對照(Rosup, 1M)

      0.1ml

      0.5ml

      1ml

      說明書

      1

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      注意事項:

      l  探針裝載后,一定要洗凈殘余的未進入細胞內的探針,否則會導致背景較高。

      l  探針裝載完畢并洗凈殘余探針后,可以進行激發波長的掃描和發射波長的掃描,以確認探針的裝載情況是否良好。

      l  盡量縮短探針裝載后到測定所用的時間(刺激時間除外),以減少各種可能的誤差。

      l  本產品僅限于專業人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。

      為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作

      使用說明:

      一、 細胞樣本:

      A.收集細胞,進行活性氧測定

      1.       細胞收集:

      懸浮細胞:2000rpm,離心5min,收集沉淀,用 0.01M PBS 或無血清培養液洗滌2次,1000rpm,離心5min,棄上清,取細胞沉淀;

      貼壁細胞:吸去培養液,用0.01M PBS或無血清培養液反復吹打,使細胞層全部進入 PBS 或培養液中,收集細胞懸液,用 0.01M PBS 或無血清培養液洗滌2次,1000rpm,離心5min,棄上清,取細胞沉淀;

      2.       DCFH-DA探針稀釋。根據預實驗的結果,用無血清培養基或者PBS將DCFH-DA探針稀釋成工作液(提供的初始濃度為10mM)。

      注意:DCFH-DA工作液濃度可在100 nM~20 μM范圍內,需進行預實驗確定最適濃度,一般情況下10 μM DCFH-DA工作液能取到理想效果。如要獲得10 μM DCFH-DA工作液10ml,取10μl M DCFH-DA (10mM)加入到10ml無血清培養或PBS中混勻即可。

      3.       加入DCFH-DA探針,用稀釋好的 DCFH-DA 熒光探針重懸細胞沉淀,一般情況下,細胞密度要求1*106-2*107/ml。 并設置陰性與陽性對照。

      陰性對照:不加探針,只加入 PBS 或培養基的細胞。

      陽性對照:已加入DCFH-DA 熒光探針,并加入活性氧供體的細胞懸液,推薦試劑工作濃度0.1mM(該濃度可以根據預實驗調整)。

      4.       37℃孵育細胞20-60分鐘。通常情況下,20-30分鐘即可。

      注意:孵育時間長短與細胞類型、刺激條件、DCFH-DA濃度等有關?梢悦扛 5min顛倒混勻一下,使探針與樣本充分接觸。

      5.       1000g,離心5min,去上清收集細胞沉淀,用 PBS 緩沖液洗滌2次,重懸細胞。

      6.       進行熒光檢測,以熒光度數值表示結果。

      B. 不收集細胞,直接將探針加入培養基測定

      1.        DCFH-DA探針稀釋。根據預實驗的結果,用無血清培養基或者PBS將DCFH-DA探針稀釋成工作液(提供的初始濃度為10mM)。

      注意:DCFH-DA工作液濃度可在100 nM~20 μM范圍內,需進行預實驗確定最適濃度,一般情況下10 μM DCFH-DA工作液能取到理想效果。如要獲得10 μM DCFH-DA工作液10ml,取10μl M DCFH-DA (10mM)加入到10ml無血清培養或PBS中混勻即可。

      2.        加入 DCFH-DA 探針,去除細胞培養基上清,加入稀釋好的 DCFH-DA 探針,加入探針的體積以能蓋住細胞為宜,通常 6 孔板單孔不少于 1ml。并設置陰性與陽性對照。

      陰性對照:不加探針,只加入培養基的細胞。

      陽性對照:已加入 DCFH-DA 熒光探針,并加入活性氧供體的細胞,推薦試劑工作濃度20-100 μM。

      3.        37℃孵育細胞20-60分鐘。通常情況下,20-30分鐘即可。

      注意:孵育時間長短與細胞類型、刺激條件、DCFH-DA 濃度等有關?梢悦扛 5min 顛倒混勻一下,使探針與樣本充分接觸。

      4.        棄去上層培養液,用無血清培養液或 0.01M PBS 反復吹打,使細胞層全部進入 PBS 或培養液中。

      5.        收集細胞懸液,用 0.01M PBS 或無血清培養液洗滌2次,去除未進入細胞內的探針,1000rpm,離心5min,棄上清,收集細胞沉淀,用PBS緩沖液洗滌2次,重懸細胞。

      6.        進行熒光檢測,以熒光度數值表示結果。

      二、動物組織樣本

      1.        細胞懸液制備:可采用單細胞懸液制備儀或傳統的組織處理方法如:酶解法、研磨法等制備單細胞懸液;

      2.        DCFH-DA探針稀釋。根據預實驗的結果,用無血清培養基或者PBS將DCFH-DA探針稀釋成工作液(提供的初始濃度為10mM)。

      注意:DCFH-DA工作液濃度可在100 nM~20 μM范圍內,需進行預實驗確定最適濃度,一般情況下10 μM DCFH-DA工作液能取到理想效果。如要獲得10 μM DCFH-DA工作液10ml,取10μl M DCFH-DA (10mM)加入到10ml無血清培養或PBS中混勻即可。

      3.        加入 DCFH-DA 探針,用稀釋好的 DCFH-DA 熒光探針重懸細胞沉淀,并設置陰性與陽性對照。

      陰性對照:不加探針,只用0.01M PBS 重懸的細胞。

      陽性對照: 已加入 DCFH-DA 熒光探針,并加入活性氧供體的細胞懸液,推薦試劑工作濃度 20-100 μM。

      4.        37℃孵育細胞20-60分鐘。通常情況下,20-30分鐘即可。

      注意:孵育時間長短與細胞類型、刺激條件、DCFH-DA 濃度等有關?梢悦扛 5min 顛倒混勻一下,使探針與樣本充分接觸。

      5.        1000g,離心 5min,去上清收集細胞沉淀,用 PBS 緩沖液洗滌 2 次,重懸細胞.

      進行熒光檢測,以熒光度數值表示結果。

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