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  2. 聚凝胺CAS No:28728-55-4

    更新:2017-4-19 15:50:29

    中文名:聚凝胺CAS No:28728-55-4說明書下載暫無
    英文名:Polybrene (hexadimethrine bromide)
    描述:Polybrene(聚凝胺,hexadimethrine bromide)是一種多聚陽離子聚合物,常用于哺乳動物細胞的DNA轉染實驗以增強脂質體的轉染效率。Polybrene目前廣泛用于逆轉錄病毒介導的基因轉染,慢病毒介導的基因轉染,作用機理可能是通過中和細胞表面唾液酸與病毒顆粒之間的靜電排斥從而促進吸附作用。Polybrene也是一種有名的抗肝素劑(肝素拮抗劑),常用來生產非特異性凝集的紅細胞。另外Polybrene也多用于蛋白測序,因為小劑量的Polybrene在自動測序分析可明顯改善多肽的降解現象。PVDF膜加入polybrene還能提高膜的親和性。
    訂購信息
      貨號規格價格品牌
      G8332500ul170GBCBIO
      G8332S10*500ul480GBCBIO
    產品介紹

      本產品為即用型溶液,粉末用0.9%NaCl配置成10mg/ml的溶液,并用0.22μM濾膜過濾除菌。使用時一般按1:1000-1:2000稀釋,依細胞種類不同稀釋比例不同,具體查閱相關文獻。

      注:Polybrene對某些細胞(如末端分化的神經元,DC細胞)毒性較大,初次應用建議先做毒性測試。

      運輸與保存方法

      冰袋(wet ice)運輸。-20 ºC可保存2年,建議分裝保存,避免反復凍融。

       

      操作步驟(僅供參考,具體使用濃度請參考相關文獻)

      實驗1:逆轉錄病毒感染(Retroviral Infection)

      (1) 重組逆轉錄病毒原液的制備:取5ml生長培養基(5%血清)加入約含單層轉染逆轉錄包裝細胞的100mm培養盤內。孵育24h后,吸去培養液并用0.45μm濾器過濾。

      (2)待感染細胞的培養:100mm培養盤內加入10ml完全培養基,細胞密度為5×105/盤。

      (3)病毒感染:細胞培養24h后,吸去完全培養液。用含polybrene的2ml病毒上清 (或將病毒原液稀釋到2ml)感染細胞,polybrene的終濃度為5μg-10μg/ml。37°C孵育3-6h。

      (4)收集病毒顆粒:加入8ml完全培養基。感染3天后,按照1:5的比例用選擇培養基裂解細胞。

      實驗2:轉染

      (1)完全生長培養基培養細胞,培養細胞密度約50%;

      (2)孵育細胞18-24h后準備DNA-培養基- Polybrene混合液,按如下操作制備混合液:①添加完全培養基(60mm培養皿2ml,100mm培養皿3ml),37°C預熱;②添加10ng~10µg質粒輕輕混勻;③加入Polybrene至終濃度為5μg-10μg/ml。輕輕混勻。以上每個成分需要按順序加入。

      (3)去除培養基,在細胞中加入DNA-培養基-Polybrene溶液,在37°C孵育細胞6-20h。細胞培養的前6h內約每1.5h輕柔混勻。

      (4)去除DNA-培養基-Polybrene溶液。用DMSO shock solution(15%DMSO in 1X HBSS)輕輕蓋住細胞(60mm培養皿3ml,100mm培養皿4ml)。每次加入溶液時用手輕晃培養盤10s,使得液體均勻分布。然后37°C孵育細胞4min。

      (5)立即去除DMSO shock solution,用完全生長培養基輕輕清洗細胞2次。對于60mm培養皿每次用5ml培養液清洗,100mm培養皿每次用10ml培養液清洗。

      (6)加入完全培養基到細胞中;

      (7)穩定轉化:去除生長培養基,按照1:5的比例用選擇培養基裂解細胞。

      瞬時表達:去除生長培養基,加入新鮮的生長培養基。24-72h后收獲細胞。

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