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    免疫組化操作步驟

    2014-12-15 12:55:02      點擊:

    免疫組化操作規程
    一儀器設備
    118cm不銹鋼高壓鍋和電爐2醫用微波爐3水浴箱; 4冰箱-18-45濕盒6耐高溫塑料切片架7可調微量移液器8定時器9pH計
    二試劑
    1PBS(磷酸鹽緩沖液pH7.27.4)NaCl 137mmol/LKCl 2.7mmol/LNa2HPO4 4.3mmol/LKH2PO4 1.4mmol/L
    2檸檬酸鹽緩沖液CBpH6.00.01mol/L1000ml配制檸檬酸三鈉 3g檸檬酸 0.4g
    3酶消化液 a0.1%胰蛋白酶液用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制 b0.4%胃蛋白酶液用0.1N的HCl配制
    三操作流程
    1 脫蠟和水化
    脫蠟前將組織芯片放在60恒溫箱中烘烤30分鐘
    1置于二甲苯I中浸泡10分鐘在二甲苯II中再浸泡10分鐘
    2無水乙醇I中浸泡5分鐘在無水乙醇II中再浸泡5分鐘
    395%乙醇中浸泡5分鐘
    485%乙醇中浸泡5分鐘
    570%乙醇中浸泡5分鐘
    6蒸餾水中浸泡5分鐘
    2抗原修復
    用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片
    1抗原熱修復
    A 高溫高壓熱修復 取一定量的0.01M檸檬酸鹽緩沖液pH6.0于壓力鍋中大火加熱至沸騰將脫蠟水化后的組織芯片置于耐高溫塑料切片架上放入已沸騰的緩沖液中蓋上鍋蓋扣上壓力閥繼續加熱至噴氣從噴氣開始計時1-2分鐘后壓力鍋離開熱源冷卻至室溫取出玻片先用蒸餾水洗兩次后用PBS洗5分鐘
    B微波熱修復取一定量的0.01M檸檬酸鹽緩沖液pH6.0于微波盒中微波加熱至沸騰將脫蠟水化后的組織芯片置于耐高溫塑料切片架上放入已沸騰的緩沖液中中高檔繼續處理10-15分鐘取出微波盒冷卻至室溫取出玻片先用蒸餾水洗兩次后用PBS洗5分鐘
    C酶消化方法常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液胰蛋白酶使用前預熱至37切片也預熱至37消化時間約為5~30分鐘胃蛋白酶消化37時間為10-30分鐘
    3免疫組織化學染色
    SP法
    1脫蠟水化
    2蒸餾水中5分鐘
    3用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2室溫封閉10分鐘蒸餾水洗1次
    4抗原修復
    5PBS洗5分鐘
    6滴加正常山羊血清封閉液,室溫10分鐘
    7甩去多余液體滴加抗371小時或者4過夜4過夜后在37復溫45分鐘
    8PBS洗2次各5分鐘
    9滴加生物素化抗孵育條件參見所用試劑盒
    10PBS洗2次各5分鐘
    11滴加酶標抗體孵育條件參見所用試劑盒
    12PBS洗2次各5分鐘
    13DAB顯色510分鐘在顯微鏡下掌握染色程度
    14蒸餾水洗終止染色蘇木素復染鹽酸酒精分化
    15脫水透明封片鏡檢
    SABC法
    1脫蠟水化
    2蒸餾水中5分鐘
    3用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2室溫封閉510分鐘蒸餾水洗1次
    4抗原修復
    5PBS洗5分鐘
    6滴加正常山羊血清封閉液室溫10-20分鐘甩去多余液體
    7滴加抗,371小時或者4過夜4過夜后在37復溫30分鐘
    8PBS洗2次每次5分鐘
    9滴加生物素化二抗孵育條件參見所用試劑盒
    10PBC洗2次每次5分鐘
    11滴加試劑SABC孵育條件參見所用試劑盒
    12PBS洗2次每次5分鐘
    13DAB顯色DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色鏡下掌握顯色程度
    14蒸餾水洗終止染色蘇木素復染鹽酸酒精分化
    15脫水透明封片鏡檢
    試劑推薦:

    英文名

    中文名

    規格/價格

     SP Kit (Broad Spectrum).

     免疫組化檢測試劑盒(通用型廣譜是指;可用于檢測兔、大鼠、小鼠和豚鼠來源的一抗)

      3ml/220  6ml/380  18ml/1070

     SP Kit (Rabbit)

     免疫組化檢測試劑盒()

      3ml/220  6ml/380  18ml/1070

     SP Kit (Mouse)

     免疫組化檢測試劑盒(小鼠)

      3ml/220  6ml/380  18ml/1070

     Double Staining Kit (Mo/HRP+Rb/AP)

     免疫組化雙染檢測試劑盒(/兔一抗)

      6ml/1860  

     DAB kit

     二氨基聯苯胺/DAB染色試劑盒(25倍稀釋)        

      1ml/90  

     DAPI

     DAPI染色液(細胞核染色液)

      10ml/90  30ml/220  

     Goat serum

     封閉用正常山羊血清(原液)

      5ml/25  10ml/40  

     Rabbit serum

     封閉用正常兔血清(原液)

      5ml/25  10ml/45  

     mouse serum

     封閉用正常小鼠血清(原液)

      5ml/35  

     IHC Antibody Diluent

     免疫組化抗體稀釋液

    100ml/120

     DAB

     DAB顯色劑(SIGMA分裝)

      5g/380  

     Trypsin Induced Antigen Retrieval Solution

     胰蛋白酶抗原修復液

      3ml/180  10ml/348  

     

     胰蛋白酶抗原修復液(含使用方法說明)

      10ml/348  

     Citrate buffer(0.01MpH6.0)

     檸檬酸鹽緩沖液(0.01M pH6.0(抗原熱修復試劑)

      1000ml//4  2000ml//8  

     Citrate buffer(1M pH6.0)

     抗原熱修復試劑(100×濃縮液)

      70ml/90  

     Poly-L-Lysine Solution(10×)

     多聚賴氨酸(10×防脫片劑)

     5ml/110  10ml/200  100ml/1600

     Poly-L-Lysine

     多聚賴氨酸(防脫片劑)

     25mg/460  50mg/750  100mg/1300

     poly-L-lysine-Prep Slides

     多聚賴氨酸防脫磨砂玻片

      50/100  

     Glass slides

     載玻片

      50/40  

     

     防脫片液(硫酸鉻鉀-明膠黏片劑粉劑)

      200ml/50  500ml/100  

     HE Staining Kit

     蘇木素-伊紅染色試劑盒

    50ml/500/180

     APES

     APES防脫片試劑

      10ml/85  

     Citrate buffer powders(0.01M pH6.0) packages

     檸檬酸鹽緩沖液(抗原熱修復試劑)0.01M pH6.0

      1000ml/pouch/4  

     Citrate buffer(1M pH6.0)

     檸檬酸鹽緩沖液 (1M pH6.0

      500ml//200  

     Permount TM Mounting Medium

     中性樹膠封片劑

      100ml/150  

     PBS, powder, (0.01MpH7.4) packages

     磷酸鹽緩沖液(0.01M pH7.4)(干粉包)

     1000ml/pouch/4  2000ml/pouch/8

     Triton X-100

     聚乙二醇辛基苯基醚

      100ml/40  

     Tris

     三羥甲基氨基甲烷

      500g/85

     Tween 20

     吐溫20

      100ml/40  

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